可實現(xiàn)每分鐘1℃降溫，大大提高凍存細胞的存活率，從冰箱拿出來后，泡沫內(nèi)襯及異丙醇也可保證逐步升溫，故也可用于細胞復(fù)蘇。

 

　　用之前在盒夾層內(nèi)注入100%濃度的異丙醇，管槽可放置1-2ml凍存管或儲液管18個，同時管槽支架可防止管子與酒精接觸，以防由于毛細作用而造成污染，或弄掉標(biāo)簽。

 

　　細胞凍存有兩種方法：傳統(tǒng)的方法是利用冷存管處于4℃、-20℃、-80℃保存，程序降溫方法是利用設(shè)定程序由室溫降低至-80℃，后再放置到液氮槽中長期保存。

 

　　程序降溫盒的使用注意事項如下：

 

　　經(jīng)驗1：凍存盒外表面有刻度的吧，異丙醇液面要高于底線。

 

　　凍存盒肯定是先放在室溫，然后放進去細胞，置于-80，利用異丙醇實現(xiàn)梯度降溫啊。)

 

　　根據(jù)論壇里的討論，異丙醇使用過一段時間后是要更換的，但是我一直沒換過，也沒發(fā)現(xiàn)很大問題。

 

　　經(jīng)驗2：我們實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮，貴重的細胞盡快轉(zhuǎn)移，不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的，很方便，效果也不錯的。

 

　　經(jīng)驗3：異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉(zhuǎn)移到液氮，效果很不錯。異丙醇熔點：-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性：口服-大鼠LD50:5840毫克/公斤;口服-小鼠LC50:3600毫克/公斤。刺激數(shù)據(jù)：眼睛-兔子100毫克/!請注意清理!

 

　　經(jīng)驗4：應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的，因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右，所以從-80℃拿出來的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次，而且保證液體量達到刻度線，否則降溫效果會受到影響。

 

　　經(jīng)驗5：凍存盒里的異丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理論上是5次以后更換異丙醇，但是異丙醇對環(huán)境有害，我們可以多用幾次，只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對細胞有毒性，尤其是室溫的時候，所以凍存盒和凍存液先放4°，等把細胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里，還放回4°，等到出細胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉(zhuǎn)入液氮。